La electroforesis en gel es una técnica muy común y útil para separar moléculas de ADN, ARN y proteínas sobre la base del tamaño molecular y la carga. 34. Tutorial sobre Electroforesis de proteínas:Vídeo de divulgación científica (IQOG-CSIC)Técnica de separación de proteínas según su tamaño y carga eléctrica me. Cuando se requiere cuantificar, sobretodo en pacientes con enfermedades hepáticas, con quemaduras, con insuficiencia cardiaca congestiva y en la evaluación del estado nutricional, debe utilizarse un método sensible como la nefelometría o la turbidimetría. Clin Chem 1998; 44: 2365-2367. Heys SD, Walker LG, Deehan DJ, Eremin OE. La distancia que recorre cada tipo de La albúmina se encuentra aumentada en los pacientes con deshidratación aguda y en los que reciben nutrición parenteral [4]. Our partners will collect data and use cookies for ad targeting and measurement. La electroforesis de proteínas se realiza normalmente en muestras de suero, orina o, en determinadas circunstancias, líquido cefalorraquídeo (LCR). Br J Haematol 2002; 119: 706-708. Open navigation menu. Med Princ Pract 2004; 13: 88-90. 44. Principales variaciones, ordenadas alfabéticamente, de la electroforesis de proteínas en suero de acuerdo con las enfermedades asociadas Fracción electroforética Aumenta Deshidratación Albúmina α-1-globulinas α-2-globulinas β-2 globulinas γ-globulinas Embarazo Infecciones agudas y crónicas Insuficiencia adrenal Terapia con adrenocorticosteroides Diabetes mellitus avanzad Síndrome nefrótico Cirrosis biliar Carcinomas (algunas veces) Enfermedad de Cushing Diabetes mellitus, algunos casos Hipotiroidismo Anemia ferropénica Hipertensión arterial maligna Nefrosis Poliarteritis nodosa Ictericia obstructiva Embarazo, tercer trimestre Amiloidosis Enfermedad de Hodgkin Enfermedades del colágeno Infecciones crónicas, especialmente las enfermedades granulomatosas Leucemia linfocítica crónica Linfomas no Hodgkin Macroglobulinema de Waldestrom Mieloma múltiple Cirrosis hepática Enfermedades reumáticas y colagenosis Crioglobulinemia Disminuye Enfermedades caquectizantes crónicas Infecciones crónicas Hemorragias, quemaduras y enteropatías perdedoras de proteínas Daño hepático (con disminución de producción de la albúmina) Desnutrición Síndrome nefrótico Embarazo Dermatitis severa Defiencia de α-1-antripsina Nefrosis Desnutrición Anemia megaloblástica Enteropatía perdedora de proteínas Enfermedad hepática severa Enfermedad de Wilson Desnutrición (por proteínas) Agammagloblinemia Hipogammaglobulinemia Síndrome nefrótico Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 57 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio se caracteriza por disminución de la albúmina con aumento de las α-2-globulinas y de las γ-globulinas característicamente policlonal. Gastroenterology 1966; 50: 119-133. Tarnoky AL. 24. The risk of bacteremia in patients with monoclonal gammopathy of undetermined significance. Sunderman FW, Jr. Studies on the Serum Proteins. Tebib J, Bonvoisin B, Lejeune E, Bouvier M. [Biclonal gammopathy in asymptomatic primary biliary cirrhosis]. En la figura 7 se muestra el proteinograma típico de una hepatopatía crónica severa. All rights reserved. ELECTROFORESIS La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa. J Clin Gastroenterol 2002; 34: 147-149. J Rheumatol 1983; 10: 210-215. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 50 Germán Campuzano Maya Usualmente no se detecta en las electroforesis de proteínas en suero, a no ser que se utilice una técnica de alta resolución. JAMA 1972; 222: 1255-1261. 114. Finalmente, en la tabla 5 se relacionan las principales indicaciones de la electroforesis de proteínas. Forman MB, Sandler MP, Ninin DT. En estos casos, las α-2-globulinas, particularmente las haptoglobinas, pueden permanecer elevadas o con tendencia al aumento. Gregersen H, Madsen KM, Sorensen HT, Schonheyder HC, Ibsen JS, Dahlerup JF. Lymphosarcoma of the lung with monoclonal (IgM) gammopathy. También se ha reportado una forma familiar de hipergammaglobulinemia policlonal. 8. De otro lado, la disminución de las β-globulinas no es frecuente en la clínica y cuando ésto se presenta, usualmente se asocia con un problema de nutrición. Se trata de un tipo de electroforesis Tsutsumi M, Hara T, Fukasawa R, Koiso K. Prostatic cancer presenting monoclonal gammopathy: report of two cases. Disdier P, Swiader L, Aillaud MF, Boucraut J, Harle JR, Weiller PJ. Ishikawa S, Komiyama Y, Kobayashi H, Tsuyuzaki J, Tokunaga S, Miyazaki A, et al. McEllistrum MC, Collins JC, Powers JS. Tanto es así que la representación del logaritmo de la masa molecular frente a la distancia migrada obedece a una línea recta para gran número de proteínas. Sin embargo, como se ha observado en el transcurso de este módulo, son muchas las enfermedades que presentan alteraciones en la composición y en el patrón electroforético de las proteínas y en donde la prueba podría tener indicación como parte integral del estudio de los pacientes con estas enfermedades o como prueba tamiz en pacientes bien seleccionados. Screening of concentrations of C-reactive protein and various plasma protease inhibitors preoperatively for the prediction of postoperative complications. Medicine (Baltimore) 2001; 80: 37-44. Obsérvese el pico monoclonal característicamente alto de base estrecha sobre la zona de En los casos de gammapatía monoclonal, las γ-globulinas, dando la típica imagen en «forma usualmente no hay modificaciones de los de campanario». Introducción Las proteínas son las moléculas orgánicas más bundantes en la célula, ellas a constituyen más del 50% del peso seco de la célula. Su nombre significa la electroforesis en geles de poliacrilamida que se realiza en presencia de SDS ('SDS-polyacrilamide gel electrophoresis'). Vol 9, W. R. Faulkner and S. Meites.American Association of Clinical Chemistry Press,1982. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 65 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio 64. Arch Neurol 2000; 57: 740-742. Generalmente se realiza en una matriz o gel y suele utilizarse para separar fragmentos de ADN, ARN, moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. in patients with rheumatoid arthritis. En la tabla 3, a modo de resumen, se presenta una relación de las situaciones clínicas en donde las fracciones electroforéticas se encuentran alteradas. La electroforesis es la técnica más utilizada para estudiar las proteínas en forma integral como una prueba de tamización. las proteínas plasmáticas por: - Fenómenos de hemoconcentración. 21. Cirrosis, hepatitis autoinmune Gammapatía policlonal Gammapatía monoclonal Cirrosis Enfermedad perdedora de proteínas Albúmina usualmente disminuida Aumento de las γ-globulinas Formación de puentes β-γ Albúmina disminuida Aumento de las α-2globulinas Disminución de las γ-globulinas Síndrome nefrótico, enfermedades exudativas de la piel, gastroenteropatías Ausencia o disminución significativa de las α-1-globulinas Deficiencia de α-1-antitripsina Hiperbetaglobulinemia Albúmina normal o disminuida Aumento de las β-globulinas Hiperlipidemia, diabetes mellitus, deficiencia severa de hierro Inmunodeficiencia Ausencia o disminución significativa de las γ-globulinas Inmunodeficiencia congénita o adquirida Deficiencia de α-1-antitripsina amiloidosis. N Engl J Med 2003; 349: 2362-2363; author reply 2362-2363. Porcel JM, Ordi J, Tolosa C, Selva A, Castro-Salomo A, Vilardell M. Monoclonal gammopathy in systemic lupus erythematosus. This is the technique more used to study the proteins in integral form as a screening test, therefore additional and more specific studies for the diagnosis of the alterations reported here are required. Am J Med 2002; 113: 194-199. J Rheumatol 1996; 23: 189-190. Eur J Haematol 1998; 61: 140-144. Low molecular weight proteinuria. S Afr Med J 1981; 59: 725-726. Indicaciones para la electroforesis de proteínas La electroforesis de proteínas es una prueba subutilizada en la práctica médica. Electroforesis capilar. Klein S. The myth of serum albumin as a measure of nutritional status. Proteins. 89. Medicina & Laboratorio 2006; 12: 47-70. Mant MJ, Hirsh J, Gauldie J, Bienenstock J, Pineo GF, Luke KH. 107. Incluir la primera micción de la mañana del dia siguiente_ Esta última debe ser emitida a la misma hora de la primera orina que se eliminó el dia anterior Plazo de entrega de resultado: 1 día hábil. En la cirrosis y en la hepatitis crónica activa, generalmente hay un aumento policlonal de las γ-globulinas IgA, IgG e IgM, que puede llegar a dar un patrón característico en donde las β-globulinas son cubiertas por las γ-globulinas; el pico conocido como «puente β-γ». Beck FK, Rosenthal TC. En este método, se incorpora el detergente SDS en un tampón de migración. Kourou K, Suga Y, Muramatsu S, Yaguchi H, Ogawa H. A case of diffuse plane normolipemic xanthomatosis associated with pancytopenia and monoclonal gammopathy. Patrón de gammapatía policlonal Esta forma es la expresión de la hiperproducción de todas las inmunoglobulinas. Biclonal gammopathy in a patient with lymphoproliferative disease and lung cancer. los conceptos con ella relacionados, la metodología y práctica de la electroforesis en papel, así como su rel evancia en el estudio de las proteínas séricas. Download Free PDF. Johnson AM, Rohlfs EM, Silverman LW. 75. 53. Sus principales funciones son transportar y almacenar una gran variedad de ligandos como la cistina, el glutatión, el calcio, el hierro, el cobre y el zinc, entre otros; regular la presión oncótica del plasma y servir como fuente de aminoácidos endógenos. Arch Intern Med 2001; 161: 864-867. Henderson JM, Stein SF, Kutner M, Wiles MB, Ansley JD, Rudman D. Analysis of Twenty-three plasma proteins in ascites. Algunas causas, ordenadas alfabéticamente, de gammapatía monoclonal Infecciones Virales, en especial hepatitis viral [42, 43] en particular por virus C [44-49], virus de inmunodeficiencia humana [50-52], mononucleosis infecciosa [53], varicela [54] Bacterianas, bacteriemia [55], brucelosis [56], endocarditis bacteriana por Lactobacillus plantarum [57] y Bartonella quintana [58], infección por Helicobacter pylori [59-62], tuberculosis [56]. Las alteraciones relacionadas con el aumento de las γ-globulinas se denominan gammapatías y pueden ser de dos tipos: policlonal y monoclonal. Cuando hay alteración de las γ-globulinas, ésta puede ser generalizada o de varias de ellas, dando la forma conocida como policlonal. Charney DA, Wasser W. A 36-year-old man with a monoclonal gammopathy and nephrotic syndrome. Lu CM, Dezube BJ, Pantanowitz L. HIV infection masquerading as monoclonal gammopathy of undetermined significance. La movilidad dependerá de la carga que presentan al pH que trabajemos. Genetic and drug-induced variation in serum albumin. Representa la forma más frecuente de gammapatía. AIDS Read 2004; 14: 372-374, 377-379. 136. Unique multimeric pattern of von Willebrand factor in a patient with a benign monoclonal gammopathy. N Engl J Med 2006; 354: 1362-1369. 7. En el recorrido de este subtítulo veremos los aspectos bioquímicos más importantes de cada grupo y sus implicaciones clínicas. Como prueba tamiz en personas mayores de 40 a 50 años, especialmente en aquellos que presentan sintomatología inespecífica y oportunidad. La electroforesis de proteínas séricas usa un campo eléctrico para separar las proteínas en el suero sanguíneo en grupos de tamaño, forma y carga similares. 119. En la figura 11 se muestra un proteinograma típico de una enteropatía perdedora de proteínas. Monoclonal gammopathy of undetermined significance and exposure to breast implants. Widespread scleredema accompanied with a monoclonal gammopathy in a patient with advanced ankylosing spondylitis. Carsuzaa F, Pierre C, Dubegny M. [Pyoderma gangrenosum and IgA gammopathy. 60. Para que esta dependencia sea correcta, es preciso Nephrotic syndrome, renal insufficiency, and a monoclonal gammopathy. El LCR se recoge mediante una punción lumbar. En todos los casos en los cuales se encuentre este patrón o se sospeche clínica o epidemiológicamente la deficiencia, se debe medir el nivel sérico de la α-1-antitripsina por nefelometría u otro método inmunológico. 1990) son: geles de almidón Dezube BJ, Aboulafia DM, Pantanowitz L. Plasma cell disorders in HIV-infected patients: from benign gammopathy to multiple myeloma. Keywords: electrophoresis, human proteins, zones, screening. Es bien conocido que en determinadas enfermedades se Figura 11. Neriishi K, Ezaki H, Arihiro K, Okamoto H. Thyroid lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue with monoclonal gammopathy occurring in an atomic bomb survivor: report of a case. Patrón de hipogammaglobulinemia Desde el punto de vista de la electroforesis de proteínas, la hipogammaglobulinemia se define electroforéticamente como una disminución de las γ-globulinas, usualmente sin otros cambios importantes en las otras bandas. Es importante que el médico se familiarice con esta prueba y que el laboratorio clínico la ofrezca con mayor regularidad Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 62 Germán Campuzano Maya Tabla 5. Seven new cases with a literature review. Por último, se establecen las bases para su adecuada interpretación. 56. Se sintetiza en el hígado en forma proporcional con la ingesta de proteínas. 29. Open navigation menu. Patrón electroforético de enfermedad hepática crónica (cirrosis). El edema y la ascitis pueden ser causa también de la hipoalbuminemia como resultado del aumento de la permeabilidad vascular [20]. Se observa hipoalbuminemia con un marcado incremento de las α-2-globulinas. Patrón electroforético de una gammapatía o una gammapatía monoclonal benigna. Youinou P, Le Goff P, Renier JC, Hurez D, Miossec P, Morrow WJ. Preoperative serum albumin level as a predictor of operative mortality and morbidity: results from the National VA Surgical Risk Study. Patrón electroforético de inflamación circunstancias, el patrón electroforético aguda. Alvarez-Ruiz SB, Garcia-Rio I, Aragues M, Fraga J, Locertales Pueyo J, Fernandez-Herrera J, et al. Meindok H. Diagnostic significance of hypoalbuminemia. SECCIÓN 6:VARIANTES DE ELECTROFORESIS 35 6.1 Electroforesis bidimensional 35 6.2 Electroforesis de capilaridad 35 6.3 Electroforesis en campo pulsado (PFEG) 36 SECCIÓN 7:VERIFICACIÓN DE LA CALIDAD ÓPTIMA DE LOS EQUIPOS Y REACTIVOS EMPLEADOS 37 7.1 Generalidades 37 7.2 Buffer para electroforesis de proteínas y ADN 37 7.3 Persulfato de amonio 37 Postgrad Med J 1990; 66: 560-562. Permite la separación de proteínas, migraciones más rápidas y posee mayor resolución. JAMA 1999; 281: 2013-2019. Patrón de deficiencia de α-1 antitripsina La deficiencia de α-1 antitripsina es una condición hereditaria que predispone al enfisema, la cirrosis y la insuficiencia pancreática. Para qué se realiza la electroforesis de proteínas séricas Las gammapatías policlonales que se encuentran asociadas con lupus eritematoso diseminado y artritis reumatoide se hacen especialmente a expensas de las IgA. 111. Kyle RA, Garton JP. Larocca LM, Zollino M, Carbone A, Eboli ML, Mango G, Leone G. Chronic myeloid leukemia with monoclonal gammopathy terminating in myeloid crisis and immunoblastic lymphoma. 52. 0,1%, a una intensidad de corriente constante de 30 mA hasta que el azul de. Abreviaturas empleadas. 85. Su principal uso es la separación de mezclas de . 95. Monoclonal proteins. Vale la pena insistir en que la interpretación de esta prueba se debe hacer en el contexto clínico y dentro de la más estricta lógica médica, como la mayoría de las pruebas de laboratorio. 90. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 54 Germán Campuzano Maya Gammapatía monoclonal de origen desconocido Ante una gammapatía monoclonal, se debe considerar en todos los casos el diagnóstico de discrasia de células plasmáticas [37], pero no debe olvidarse, como ya se ha expresado, que también se puede presentar con otras enfermedades o como un hallazgo único en algunos pacientes [38-40]. Isr Med Assoc J 2002; 4: 466-467. Muy similar al patrón de la inflamación aguda, hay un aumento más discreto de las α-2-globulinas que pueden ser normales y predomina la gammapatía policlonal. bromofenol esté aproximadamente a 1 mm del extremo inferior del gel. La mayoría de las personas a quienes se les detecta la presencia de un pico monoclonal tienen un mieloma múltiple. De éstas, la más frecuente es la falta de preparación del paciente, cuando éste no guarda un ayuno adecuado antes A B Figura 3. leishmaniasis [63] Enfermedades del tejido conectivo Arteritis temporal [64] Artritis reumatoide [65-67] Escleroderma [68] Lupus eritematoso discoide [69, 70] Lupus eritematoso sistémico [71-75] Sarcoidosis [76] Enfermedades hepáticas Cirrosis [77, 78] Alcoholismo Hepatitis autoinmune Cirrosis biliar primaria [78] Hepatitis inducida por virus [44-49] Esclerosis múltiple [79, 80] Colangitis esclerosante primaria Enfermedades malignas Tumores solidos [81] Tumores de ovario [82] Cáncer de pulmón [83, 84] Tumores renales Cáncer de hígado [85] Tumores gástricos [86] Cáncer de próstata [87] Enfermedad renal [88] Enfermedades hematológicas y linfoproliferativas Anemia perniciosa [89, 90] e infección por Helicobacter pylori [91] Ataxia telangiectásica [92] Enfermedad de von Willebrand adquirida [93-98] Enfermedad de Hodgkin [99] Leucemia linfocítica crónica [100, 101] Leucemia mieloide crónica [102] Leucemia mielomonocítica [103] Linfoma de Burkitt [104, 105] Linfomas no Hodgkin [106-108] Macrocitosis (sin etiología asociada) [109] Policitemia rubra vera [110] Síndrome de anticoagulante lúpico [111-115] Talasemia [116] Trombocitosis esencial [110] Enfermedades renales Glomerulonefritis proliferativa [117] Insuficiencia renal [118] Síndrome nefrótico [118, 119] Medicamentos Carbamazepia [120] Varias no clasificadas en los grupos anteriores Angioedema adquirido tipo 2 [121] Hiperostosis esquelética idiopática [122] Hiperparatiroidismo primario [123] Implantes de mama [124] Meningiona coroideo [125] Polineuropaía [126] Síndrome de Schnitzler (urticaria crónica, fiebre y gammapatía monoclonal) [127-129] Sobrevivientes de bomba atómica [130, 131] Tiroiditis de Hashimoto [132] Trasplantes (por el tratamiento inmunosupresor), cardiaco [133], renal [134, 135] Xantomatosis normolipémica [136]Hipertensión pulmonar [137] Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 56 Germán Campuzano Maya Una variante de este patrón es el que se presenta en los casos de inflamación subaguda, en los cuales los reactantes de fase aguda, especialmente la proteína C reactiva, la α-1-antitripsina, la α-1glicoproteína ácida (orosomucoide) y el complemento, se «normalizan» o tienden a «normalizarse», en tanto que la reacción inmunológica es mayor, con aumento de las inmunoglobulinas, característicamente de tipo policlonal. En la práctica, la sensibilidad para detectar «grupos», «bandas» o «zonas» de proteínas depende del medio en el cual se hace la electroforesis ya sea papel de filtro, acetato de celulosa, poliacrilamida o gel de agarosa; del medio en el cual se «corren» sea ácido o alcalino, de la sensibilidad de los instrumentos, de la habilidad del operador; y, de la capacidad de análisis e interpretación de quien solicita o aplica la prueba en la clínica. Severe, reversible pulmonary hypertension in a patient with monoclonal gammopathy and features of dermatomyositis. Permite identificar aquellos pacientes que requieren una cuantificación específica mediante tecnología más sensible, como la nefelometría y la turbidimetría, de acuerdo con la alteración o las alteraciones que serán analizadas más adelante. Br J Dermatol 2004; 151: 937-939. Es una excelente herramienta que le permite al clínico tener una visión general de la homeostasis de las proteínas, que bien usada puede ser de utilidad en el manejo integral del paciente, así como lo son el hemograma y el citoquímico de orina. Fig. 93. Horstman AL, Serck SL, Go RS. Am J Hematol 2004; 77: 421. Sadighi Akha AA, Humphrey RL, Winkelstein JA, Loeb DM, Lederman HM. 14. Lo mismo que en pacientes con con anemia ferropénica. Matsubayashi S, Tamai H, Nagai K, Kuma K, Nakagawa T. Monoclonal gammopathy in Hashimoto’s thyroiditis and malignant lymphoma of the thyroid. También puede haber disminución de las α-2-globulinas por descenso en los niveles séricos de ceruloplasmina en la enfermedad de Wilson, en la desnutrición, en el síndrome nefrótico [33] y en los pacientes con enfermedades perdedoras de proteínas. Como colo rante usamos . Anagnostopoulos A, Galani E, Gika D, Sotou D, Evangelopoulou A, Dimopoulos MA. Braunstein AH, Keren DF. ca 1948. aisló e identificó por electroforesis proteínas de la sangre y de la leche, además obtuvo por absorción la sepa-ración de diversos aminoácidos. Waldmann TA. 2. la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS De este modo se es capaz de separar: • proteínas de masa molecular idéntica que difieren en su pI ó • proteínas con valores de pI similares pero con diferentes masas moleculares. Las proteínas de menor tamaño se resuelven en la parte inferior del gel, y las de mayor tamaño van quedando retrasadas, observándose en la parte superior. 2. 1 Cu2+ se acompleja con 4 NH. Módulo 5 (Inmunología), número 6. La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) con dodecilsulfato sódico (SDS) permite la separación de proteínas en función de su masa molecular. Kyle RA. Las Infecciones intrauterinas generan un gran aumento de IgM en el feto y esta alteración puede ser determinada en sangre de cordón en el momento de nacimiento [4]. Campuzano-Maya G. La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio. Valor de referencia en la electroforesis (puede variar de acuerdo con el laboratorio): 0,72 a 1,27 g/dL; 11,1 a 18,8%. Papadaki HA, Pontikoglou C, Stavroulaki E, Minadakis G, Eliopoulos DA, Pyrovolaki K, et al. Role of Helicobacter pylori infection in the incidence and clinical course of monoclonal gammopathy of undetermined significance. En este grupo se encuentran la transferrina, las β-lipoproteínas, la hemopexina, la fibronectina, la β-2-microglobulina y varias fracciones del complemento sérico, especialmente las C3 y C4. 59. Las γ-globulinas se encuentran disminuidas en la hipogammaglobulinemia y en la agammaglobulinemia primaria o secundaria. Chordoid meningioma with polyclonal gammopathy. 105. Utilidad clínica El estudio de la albúmina por electroforesis tiene mayor importancia que su determinación por métodos químicos, debido a que permite identificar los casos, afortunadamente raros, de analbuminemia [6, 7] y de bisalbuminemia [8]. La electroforesis es una técnica de laboratorio que se usa para separar moléculas de ADN, ARN o proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica. La electroforesis de proteínas es un análisis que suele usarse para encontrar sustancias anormales denominadas proteínas M. La presencia de las proteínas M puede ser un signo de un tipo de cáncer denominado mieloma o mieloma múltiple. Estructura de las proteínas La función de las proteínas está basada en su estructura tridimensional (orientación en el espacio de las cadenas polipeptídicas). La electroforesis en gel es el método más conveniente para realizar separaciones de macromoléculas (ADN y Proteínas). Rev Med Interne 1996; 17: 929-932. La forma más severa de la hipogammaglobulinemia es la agammaglobulinemia con desaparición de las γ-globulinas. separar colorantes, vitaminas u otros compuestos químicos. Gibbs J, Cull W, Henderson W, Daley J, Hur K, Khuri SF. 46. Carbamazepine induced transient monoclonal gammopathy and immunodeficiency. 3.2. 131. Lupus anticoagulant in myasthenia gravis associated with IgM gammopathy. Bradford y Lowry, Electroforesis en gel de poliacrilamida SDS-PAGE. Campuzano Maya G. Utilidad clínica de la electroforesis de proteínas. Electroforesis en gel de poliacrilamida Calcular gráficamente la masa molecular aparente de proteínas por comparación con proteínas patrones en un grafico de distancia vs Log PM aparente. Surg Today 2000; 30: 202-206. Técnicas de separación de proteínas. Biclonal IgM gammopathy in chronic lymphocytic leukemia. El patrón de la zona de las γ-globulinas puede dar una idea en relación a la(s) inmunoglobulina elavada(s): las enfermedades bacterianas crónicas, como la tuberculosis, usualmente presentan un aumento de todas las inmunoglobulinas séricas; en la cirrosis biliar primaria es característico el aumento marcado de las IgM, así como lo es las IGg en la hepatitis crónica activa y las IgA en la cirrosis portal; y, finalmente, las IgE se encuentran elevadas en pacientes con asma u otras enfermedades alérgicas especialmente en niños [4]. Relationship between rheumatoid arthritis and monoclonal gammopathy. En esta técnica se aplica una corriente eléctrica para desplazar las proteínas sobre una capa fina de agar similar a un gel. 69. Corti MC, Guralnik JM, Salive ME, Sorkin JD. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 55 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio Tabla 2. Las proteínas, tienen cargas eléctricas diferentes y cuando se ponen en un campo eléctrico, sus moléculas se desplazan de acuerdo con su carga eléctrica y su peso molecular. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 49 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio Dentro de los procesos inflamatorios que disminuyen los niveles séricos de albúmina se encuentran los conocidos como reactantes de fase aguda y las enfermedades inflamatorias crónicas, como las enfermedades reumáticas las más importantes [4]. Br Med J (Clin Res Ed) 1983; 286: 224. A case report. The monoclonal gammopathies. Clin Biochem 2005; 38: 654-658. 129. Inmunología Tanto la albúmina como la globulina transportan sustancias por el torrente sanguíneo. 28. Obsérvese el pico «monohipotiroidismo, cirrosis biliar, nefrosis y clonal» correspondiente a transferrina. Debido a que la α-1-antitripsina es sintetizada en el hígado, en los pacientes con cirrosis se puede encontrar disminución de esta banda, proporcional al grado del daño hepático. TP2: Extracción y cuantificación de proteínas Objetivo Comparar métodos de extracción de proteínas a partir de distintos organismos. 109. Gastroenterology 1990; 99: 1845-1846. Electroforesis en tiras de acetato de celulosa Separar mediante electroforesis las proteínas contenidas en el suero. Discoid lupus erythematosus and monoclonal gammopathy. Gammapatía monoclonal La gammapatía monoclonal, contrario a lo que sucede en la gammapatía policlonal, es el resultado de la hiperproducción de una inmunoglobulina única, dependiente de una sola clona de células productora, que con el tiempo da como resultado da como resultado el aumento desproporcionado de una determinada inmunoglobulina, o fracción de ésta, que a la electroforesis de proteínas da una banda estrecha o un pico alto con base estrecha, ubicado en la región correspondiente eletroforeticamente a la sustancia producida por las células productoras de las mismas, banda o pico denominado gammapatía monoclonal [4]. Tumori 1989; 75: 106-109. 99. Goransson J, Jonsson S, Lasson A. Hamazaki K, Baba M, Hasegawa H, Kai M, Araki M, Watanabe N, et al. Hofmann W, Rossmuller B, Guder WG, Edel HH. J Dermatol 1979; 6: 103-109. La electroforesis de proteínas permite identificar y separar las proteínas por la sumisión a la acción de un campo eléctrico. [email protected] Nephron 1977; 19: 288-294. Presse Med 1985; 14: 487. Aparte del patrón electroforético ya descrito, dentro de las enfermedades del hígado que expresan cambios en la electroforesis de proteínas se incluyen la cirrosis en sus diferentes etapas y la hepatitis crónica activa, de origen autoinmune. Todos los complejos SDS-proteína tienen carga negativa y migran, por lo tanto, en el mismo sentido. ELECTROFORESIS DE, Inmunología La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio Germán Campuzano Maya1 Resumen: la electroforesis de proteínas es una técnica de laboratorio que permite la separación de las proteínas de acuerdo a sus características físicas y al método utilizado. En la tabla 1 se relacionan los valores de referencia esperados para cada una de las fracciones electroforéticas de una electroforesis de proteínas de suero en acetato de celulosa [5]. Am J Hematol 2006; 81: 115-117. Doberauer C, Sanner B, Henning B. Con la técnica de electroforesis más utilizada en la clínica, el acetato de celulosa, es posible identificar cinco grupos a saber: albúmina, α-1-globulinas, α-2-globulinas, β-1-globulinas, β-2-globulinas y γ-globulinas, como se muestra en la figura 1. Se diferencia del patrón de inflamación aguda en que en el síndrome nefrótico la alteración de las β-globulinas es menos intensa y la hipoalbuminemia es más importante, con valores en ocasiones extremadamente bajos. En estas Figura 5. Kumar N, Rodriguez M. Scleromyxedema in a patient with multiple sclerosis and monoclonal gammopathy on interferon beta-1a. Este fluido se llama suero. Ann Hematol 2005; 84: 317-320. Las proteínas totales se pueden medir por métodos químicos y de acuerdo con su movilidad electroforética, se pueden separar en diferentes grupos, bandas o zonas. Protein (total protein) in serum, urine, and cerebrospinal fluid: albumin in serum. Mousavi MM. 92. - Las moléculas cargadas se mueven a través de un gel . Patrón electroforético de un síndrome neesquematiza el proteinograma típico del frótico. Patrón electroforético de una gammapatía policlonal. Esta morfología se asocia con infecciones crónicas independientemente de su causa, enfermedades granulomatosas, cirrosis, colagenosis, enfermedades alérgicas y algunas neoplasias, especialmente las de origen hematológico, como la enfermedad de Hodgkin. 82. 26. Monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS) in patients with solid tumors: effects of chemotherapy on the monoclonal protein. Subpopulations of high density lipoproteins in homozygous and heterozygous Tangier disease. Análisis de proteínas específicas. Annu Rev Med 1979; 30: 199-211. La proteína que con mayor frecuencia modifica negativamente esta fracción es la haptoglobina. En este proteinograma hay disminución variable de la albúmina con aumento moderado en las α-1-globulinas, las α2-globulinas, las β-globulinas, especialmente el complemento, y las γ-globulinas, por aumento policlonal de las IgG e IgM. Patrón de inflamación aguda El patrón electroforético de la inflamación aguda se caracteriza por disminución de la albúmina y elevación de las α-1-globulinas y las α-2-globulinas, entre las cuales se encuentran la mayoría de los reactantes de fase aguda. Utilidad clínica Las alteraciones relacionadas con el aumento de las γ-globulinas se denominan gammapatías y pueden ser de dos tipos: policlonal y monoclonal. Sarcoidosis 1992; 9: 70-72. 9. Am J Gastroenterol 2002; 97: 1371-1374. Una causa importante de hipoalbuminemia son las enfermedades hepáticas, debido a que la mayoría de la albúmina se produce en el hígado y en consecuencia cualquier daño sobre el parenquima de este disminuye las síntesis de la proteína. Close suggestions Search Search. γ-globulinas La fracción de las γ-globulinas está compuesta predominantemente por anticuerpos del tipo de inmunoglobulinas G (IgG). α-2-globulinas En este grupo se encuentran la haptoglobina, la α-2-macroglobulina, la α-2-lipoproteína y la ceruloplasmina. 115-126 37. Soluciones de extracción de las diferentes fracciones proteínicas. SANCHEZ GOMEZ DN; VILLAMIZAR MOGOLLON YT; CASTRO LEON DH; MORA PINILLA En algunos pacientes con deficiencia de hierro severa, se puede presentar un «pico monoclonal», muy similar al que se presenta en el mieloma múltiple [35], como se observa en la figura 4. Ann Dermatol Venereol 1989; 116: 707-713. La haptoglobina se aumenta en los pacientes con tratamiento de corticosteroides. compuestos que poseen grupos ionizables ( aminoácidos, péptidos, prote ínas, ácidos n ucleicos) teniendo en cuenta que la carga neta de estas s ustancias. La dirección de la migración de las moléculas depende del pH Médico especialista en Hematología y Patología Clínica. Prevalence of monoclonal gammopathy of undetermined significance. 71. sencia de proteínas «M» utilizando una combinación de pruebas que debe incluir una electroforesis de proteínas séricas, inmunofijación sérica y la cadena ligera libre de suero. Proteínas de transporte 12 Proteínas de función desconocida 16 Enzimas y otras proteínas >10 El método más común para analizar las proteínas plasmáticas es la electroforesis, (la migración de proteínas por acción de un campo eléctrico), existen diversos tipos de esta y cada una usa un medio de soporte diferente. Además del doble pico que se observa en la fracción de la albúmina en este caso hay alteraciones en las fracciones Finalmente, la prealbúmina es una proteína que se encuentra predominantemente en el líquido cefalorraquídeo, en donde llega a representar hasta el 4%. Serum albumin level and physical disability as predictors of mortality in older persons. Figura 1. Am Fam Physician 2005; 71: 105-112. Eur J Haematol 2005; 75: 146-149. 77. Electroforesis en geles de gradientes. Blood 1973; 42: 429-436. Atherosclerosis 2001; 156: 217-225. The spectrum of IgM monoclonal gammopathy in 430 cases. A modo de resumen del acapite análisis cualitativo, en la tabla 4 se resumen las características de los principales patrones electroforéticos. Macrocytosis associated with monoclonal gammopathy. Leucocytoclastic vasculitis, hepatitis C virus-associated mixed cryoglobulinaemia with biclonal gammopathy and Waldenstrom macroglobulinaemia. 30. 477-540 5. Es el resultado de un estímulo inmunológico relacionado con procesos inmunes crónicos como las enfermedades del tejido conectivo como lupus eritematoso diseminado y artritis reumatoide, enfermedades hepáticas como cirrosis, hepatitis crónica activa, enfermedades infecciosas, especialmente las formas más crónicas como osteomielitis, leishmaniosis visceral, lepra y tuberculosis, sarcoidosis y enfermedades malignas especialmente, leucemias y linfomas. En los pacientes con deficiencia de hierro (recuérdese que la prevalencia global de esta deficiencia puede llegar hasta el 30% [34]) se encuentra aumento de las β-globulinas debido al aumento de los niveles de transferrina, situación que es más notoria en gestantes, mujeres menstruantes y adolescentes. 128. Existen 4 niveles de complejidad creciente y cada uno se construye a partir del anterior: Estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. Andreone P, Gramenzi A, Cursaro C, Bernardi M, Zignego AL. Profesor Titular (R), Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia; Médico Director Laboratorio Clínico Hematológico, Medellín, Colombia. [Transitory IgM monoclonal gammopathy associated with brucellosis and tuberculosis (author’s transl)]. movilidad en un campo eléctrico. 2. Palabras clave: electroforesis, proteínas, análisis cualitativo, análisis cuantitativo. Ryffel B, Car BD, Woerly G, Weber M, DiPadova F, Kammuller M, et al. Se compara el patrón de la electroforesis del paciente, después de ser «leído» con un densitómetro, con el esperado, de acuerdo al conocimiento previo de patrones de la «electroforesis normal» y de algunas formas o patrones anormales [138]. Serum iron concentration and transferrin saturation in the diagnosis of iron deficiency in children: normal developmental changes. of a polyclonal gammopathy]. diferentes conformaciones de las proteínas tal que la longitud de la cadena, que refleja la masa, es la única que determina la velocidad de migración en una SDS-PAGE. J Korean Med Sci 2004; 19: 481-483. Rajkumar SV, Kyle RA, Plevak MF, Murray JA, Therneau TM. En la práctica, las α-2-globulinas no se encuentran disminuidas, ya sea porque sus componentes no disminuyen en forma significativa o porque, cuando esto sucede, algunos de ellos se incrementan compensando los que se disminuyen. Eur J Gastroenterol Hepatol 1999; 11: 205-207. En el suero humano se han identificado más de 120 proteínas con un amplio rango de heterogeneidad y han sido clasificadas en regiones tales como la albúmina, las α-globulinas, las β-globulinas y las γ-globulinas de acuerdo a su carga eléctrica y a su peso molecular. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 63 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio 7. Taher A, Abiad R, Uthman I. Coexistence of lupus anticoagulant and acquired haemophilia in a patient with monoclonal gammopathy of unknown significance. 68. 98. Patrón electroforético de una enteropatía produce una mayor pérdida de proteínas perdedora de proteínas. La albúmina se encuentra disminuida en una gran variedad de situaciones clínicas como resultado de la disminución de su síntesis o aumento de su catabolismo, ya sea por utilización o por pérdida, o la combinación de ambos mecanismos [4]. En el primer grupo están las técnicas que Arch Surg 1999; 134: 36-42. Elementos necesarios para una electroforesis Castaman G, Rodeghiero F, Di Bona E, Ruggeri M. Clinical effectiveness of desmopressin in a case of acquired von Willebrand’s syndrome associated with benign monoclonal gammopathy. En los casos en que ésta es muy importante puede llegar a la unión de las γ-globulinas y de las β-globulinas y en los casos más intensos puede dar el clásico cuadro de unir dos fracciones: puente β-γ (beta-gamma). El método más empleado para electroforesis de proteínas se lleva a cabo en un sistema discontinuo; es decir, un gel conformado por dos geles de poliacrilamida (uno de resolución y . 103. También se puede afectar sólo una fracción que se eleva, dando la forma «monoclonal» o en «pico de campanario», usualmente asociada con disminución de las inmunoglobulinas no comprometidas. Summary: protein electrophoresis is a laboratory test that allows the separation of the proteins according to its physical characteristics and the used method. El pico monoclonal usualmente se encuentra localizado en la banda de las γ-globulinas, pero puede estar localizado en la zona de las β-globulinas y rara vez en la de las α-2-globulinas. Four new cases and review of the literature. 4. J Investig Allergol Clin Immunol 2000; 10: 41-43. HIV infection masquerading as monoclonal gammopathy of unknown significance. Desde el punto de vista práctico, la interpretación de la electroforesis se debe hacer cuantitativa y cualitativamente, analizando los valores absolutos de cada fracción y observando el patrón electroforético, para determinar la presencia o ausencia de patrones previamente reconocidos. Admission serum albumin level and length of hospitalization in elderly patients. Address: Copyright © 2023 VSIP.INFO. En términos generales, las variaciones de las inmunoglobulinas, y en consecuencia del patrón de las γ-globulinas, pueden orientar el diagnóstico del médico, por ejemplo: las IgG tienden a predominar en los procesos de respuesta autoinmune; las IgM en infecciones virales y en algunas parasitosis como la malaria. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud . Medellín, Colombia. En estos casos también se eleva el fibrinógeno, situado en las β-globulinas, pero no aparece cuando la electroforesis se hace en suero, debido a que éste se retira con el coágulo sanguíneo. Intern Med 2001; 40: 952-955. Electroprotidograma en la distrofia con edemas: (Estudio de 43 casos) . Jpn J Clin Oncol 1984; 14: 699-704. 108. Otra proteína que eleva esta fracción es la ceruloplasmina. Sharma AM, Fried J, Sharma OP. A continuación se describen los patrones electroforéticos más característicos. Paueksakon P, Revelo MP, Horn RG, Shappell S, Fogo AB. N Engl J Med 2003; 349: 1192-1193. También se elevan en los pacientes con diabetes mellitus, hepatopatías crónicas y ataxia telangiectásica. E-mail: [email protected] 1 Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 47 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio de la solución y del punto isoeléctrico de la proteína; en tanto que el grado de desplazamiento, depende de la carga eléctrica de cada proteína, y, con menor importancia, de otros factores como la diferencia de potencial, el peso molecular, el tamaño de la molécula, la conductividad del medio y el tipo de soporte [4]. Módulo 5 (Inmunología), número 6. 47. Lipsker D, Veran Y, Grunenberger F, Cribier B, Heid E, Grosshans E. The Schnitzler syndrome. Antes de preparar las muestras con los diferentes componentes, realizamos una preparación de las proteí- nas consistente en hacer dos procesos de ebullición en el bloque térmico a 100 °C durante 5 min, desechando 254 De la Fuente González A et al. 20. 22. Análisis de proteínas mediante electroforesis e inmunotransferencia (Western blot) Piel . La electroforesis en gel se utiliza en biología molecular, genética y bioquímica: La electroforesis en gel de muestras grandes de ADN y ARN se efectúa en geles de agarosa. El SDS imparte una carga negativa neta a las proteínas, enmascarando su carga intrínseca. La proteína «M» se considera que es medible si es ≥ 1 g/dL en el suero y ≥ 200 mg/día en la orina. Lamboley V, Zabraniecki L, Sie P, Pourrat J, Fournie B. Myeloma and monoclonal gammopathy of uncertain significance associated with acquired von Willebrand’s syndrome. La hipoalbuminemia en los procesos inflamatorios puede producirse como respuesta a uno o varios de los siguientes factores: (1) hemodilución, (2) pérdida de albúmina hacia el espacio extravascular en las áreas de inflamación, (3) aumento por las células locales y (4) por disminución en su síntesis como resultado directo de algunas citoquinas como el factor tumoral α, las interleuquinas 1 y 6 y por aumento de la presión osmótica de las proteínas [9-11]. 97. Mayo Clin Proc 1987; 62: 719-731. Obsérvese cómo hay dismipor el intestino, que característicamente nución de todas las fracciones electroforéticas. En la figura 9 se muestra el proteinograma típico de una hipogammaglobulinemia. 138. Los casos homocigóticos se pueden diagnosticar con facilidad cuando prácticamente desaparece la fracción de las α-1-globulinas, ya que Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 59 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio la α-1-antitripsina representa el mayor componente de la fracción; en los casos heterocigotes, la disminución puede no ser tan aparente o estar enmascarada por otras proteínas que hacen parte de la fracción, sobre todo cuando está asociado un componente inflamatorio que explica el aumento de reactantes de fase aguda. Fuente de energía para la electroforesis. Se usa una corriente eléctrica para mover las moléculas a través de un gel o de otra matriz. A Eletroforese de Proteínas Séricas (EPS) é um método laboratorial para separar as proteínas presentes no plasma em frações, de acordo com suas respectivas cargas elétricas. Mult Scler 2004; 10: 85-86. Clin Nephrol 1989; 31: 156-159. Influence of methodology on the detection and diagnosis of congenital analbuminemia. 94. Definiciones La electroforesis es una técnica de laboratorio que permite la separación de las proteínas de acuerdo con sus características físicas. 65. Kohn J. (A) electroforesis de proteínas en suero; (B) la misma muestra en plasma, en cierculo se muestra el fibrinógeno.. Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 52 Germán Campuzano Maya de tomársele la muestra. 32. De acuerdo con estudios recientes, la gammapatía monoclonal de origen desconocido tiene una prevalencia de 3,2% en población mayor de 50 años [41] y si se detecta oportunamente puede ser objeto de manejo adecuado. L a electroforesis de proteínas es una prueba de laboratorio de utilidad para el estudio de las enfermedades que alteran las proporciones de las proteínas en un amplio grupo de enfermedades como se analizará en el curso de este módulo. Seve P, Turner R, Stankovic K, Perard L, Broussolle C. Transient monoclonal gammopathy in a patient with Bartonella quintana endocarditis. Manual de Electroforesis de Proteinas Cargado por nicobbca Descripción: El principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por acción de un campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular. Close suggestions Search Search. Además de lo anterior, la hipoalbunemia, es un factor de riesgo independiente de mortalidad en individuos de edad [21, 22]; la albúmina baja, al momento de admisión en pacientes geriátricos, es un predictor de larga estadía y evolución menos satisfactoria [23, 24]; la albúmina baja preoperatoria es un predictor negativo a 30 días posoperatorio con aumento de la morbilidad y la mortalidad [25] lo mismo que en pacientes con cáncer de colon y recto [26] igual a lo que sucede con el aumento de la proteína C reactiva [27]. Los niveles de albúmina no se correlacionan con la severidad, el pronóstico ni con la alteración de la función hepática [13, 14], la cual deberá ser evaluada por métodos complementarios convencionales. La inmunoglobulina que más se eleva es la IgM. 79. También se aumentan en los pacientes que presentan dislipidemias, especialmente en aquellos con elevaciones importantes del coleste- Figura 4. Laboratorio Clínico Hematológico S.A. Manual de Procedimientos. Markowitz GS, Zdunek MP, D’Agati VD. Las α-1-globulinas se encuentran disminuidas clásicamente en la deficiencia de la α-1-antitripsina, especialmente en los casos homocigóticos en donde puede haber ausencia de la fracción, dando un patrón electroforético característico, como se analizará más adelante. 54. El diseño de un aparato para electroforesis consiste básicamente en una Cuando está bien indicada y es interpretada correctamente, tiene una buena relación costo-beneficio y es de gran ayuda para el médico. Protein-energy undernutrition among elderly hospitalized patients: a prospective study. Principales aminoácidos responsables de la carga neta de una proteína, dependiendo del pH. An unusual case of systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, and transient monoclonal gammopathy. View Electroforesis de proteínas.pdf from BIOCHEMEST 23 at Valle de México University. El mieloma afecta un tipo de glóbulos blancos denominados células plasmáticas, que se encuentran en la médula ósea. 13. Br J Rheumatol 1988; 27: 412-413. La electroforesis es un método por el cual se separan moléculas por tamaño o peso molecular usando una corriente eléctrica. Trata-se do teste de triagem mais utilizado para investigação de anormalidades protéicas presentes no sangue. Kyle RA, Therneau TM, Rajkumar SV, Larson DR, Plevak MF, Offord JR, et al. Esta técnica, habitualmente denominada electroenfoque se basa en . N Engl J Med 1998; 338: 1202-1211. 113. En la figura 13 se esquematiza el proteinograma típico de una gammapatía monoclonal. 31. Am J Kidney Dis 2001; 38: 1135-1140. En la parte inferior de cada banda se enumeran sus principales componentes. Serum albumin: a prognostic indicator in patients with colorectal cancer. Immunodeficiency 1993; 4: 67-69. La SDS-PAGE es la electroforesis más utilizada para el análisis de proteínas debido a: La gran mayoría de las proteínas son solubles en SDS. Cuando se encuentra aumento de las α-2-globulinas y no hay criterios para establecer diagnóstico de síndrome nefrótico (hipoproteinemia, hipoalbuminemia, edema, hiperlipidemia y proteinuria), se debe considerar la posibilidad de que éste Medicina & Laboratorio, Volumen 12, números 1-2, 2006 51 La electroforesis de proteínas: más que una prueba de laboratorio se deba a un aumento de las haptoglobinas, de la ceruloplasmina u otras proteínas, como la α-1-glicoproteína ácida, el fibrinógeno y la antitripsina, la mayoría de ellas como reactantes de fase aguda que, a su vez, pueden estar asociados con colagenosis, infecciones, enfermedades malignas y necrosis tisular, entre otras circunstancias clínicas. soufflé de coliflor y papa, religión de la cultura chincha, sanciones administrativas servidores públicos, reveladores en cromatografía, biblioteca virtual wiener, convocatoria ingeniero geógrafo 2022, modelos de planificación anual nivel inicial, municipalidad carmen de la legua ruc, leyendas interesantes, templo del sol pachacamac caracteristicas, descargar la biblia del pescador gratis para pc, empleada del hogar cama afuera, tratado de libre comercio méxico perú beneficios, teoría del desarrollo económico macroeconomia, estudio de huesos y articulaciones, brachiaria decumbens ficha técnica, bruce lee predijo la muerte de su hijo, melgar vs universitario entradas 2022, bálsamo para labios inkafarma, modelo recurso de apelación administrativa municipalidad, corriente alterna ejemplos, conducta prosocial y altruismo, trabajo en clinicas de huánuco, diferencia entre glory 560 y 580, agendas 2023 personalizadas, jurisdicción penal perú, brunner y suddarth enfermería medicoquirúrgica 14a ed 2019, metro independencia juegos, lima este 1 que distritos comprende, uancv notas virtual class, propuestas para mejorar las prácticas profesionales, bosque seco ecuatorial, proveedores de insumos agrícolas, como es la democracia en el perú brainly, lista de revistas indexadas en scopus, reacciones de identificación de cationes, ceplan, administración y negocios internacionales, que relación tiene la ciencia con el conocimiento científico, real sociedad pronóstico, cómo son las hojas de la manzanilla, semilla de palma africana, causa rellena de atún ingredientes, defensa civil josé luis bustamante y rivero, código civil animales, partes del scanner automotriz, traductores oficiales en lima, presentar novio a familia, lapiceros escarchados, universidades públicas en perú, cuales son los mantras más poderosos, actividades de tutoría individual, municipalidad de breña horario de atención, revista amazónica de ciencias ambientales y ecológicas, vilcashuamán descripcion, características del territorio de ventas, clases de canto para niños, concurso docente 2022 unmsm, tallarines a la huancaína buenazo, casos prácticos de valoración aduanera, escritorios gerenciales modernos perú, cicaplast gel b5 contraindicaciones, método de valoración aduana, obligaciones financieras que cuenta es, pozuzo como llegar desde lima, ensayo de crecimiento y desarrollo económico pdf, , responsabilidad jurídica del presidente de la república, pai inventario de evaluación de la personalidad, libro de enoc completo pdf gratis, convocatoria hospital regional trujillo 2022, inundaciones en lima 2017, universidad central enfermería, cual es el mensaje de la encíclica laudato si, shakira padres origen, ejercicios para síndrome subacromial hombro, mazamorra de piña para bebés, escribimos nuestro ensayo argumentativo pdf, pedro ruiz gallo ciudad, ensalada de naranja y atún,
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